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    趨化因子配體5 (RANTES/CCL5)ELISA 檢測試劑盒

    發(fā)布時間: 2013/11/22  點擊次數(shù): 622次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    ELISA 檢測試劑盒試驗原理:

    RANTES/CCL5試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知RANTES/CCL5濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將RANTES/CCL5和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中RANTES/CCL5的濃度呈比例關(guān)系。

     

    ELISA 檢測試劑盒內(nèi)容及其配制

    試劑盒成份(2-8℃保存)

    96孔配置

    48孔配置

    配制

    96/48人份酶標板

    1塊板(96T)

    半塊板(48T)

    即用型

    塑料膜板蓋

    1塊

    半塊

    即用型

    標準品:4.0ng/ml

    1瓶(0.6ml)

    1瓶(0.3ml)

    按說明書進行稀稀

    空白對照

    1瓶(1.0ml)

    1瓶(0.5ml)

    即用型

    標準品稀釋緩沖液

    1瓶(4.0ml)

    1瓶(2.0ml)

    即用型

    生物素標記的抗RANTES/CCL5抗體

    1瓶(6.0ml)

    1瓶(3.0ml)

    即用型

    親和鏈酶素-HRP

    1瓶(8.0ml)

    1瓶(4.0ml)

    即用型

    洗滌緩沖液

    1瓶(20ml)

    1瓶(10ml)

    按說明書進行稀釋

    底物A

    1瓶(6.0ml)

    1瓶(3.0ml)

    即用型

    底物B

    1瓶(6.0ml)

    1瓶(3.0ml)

    即用型

    終止液

    1瓶(6.0ml)

    1瓶(3.0ml)

    即用型

    標本稀釋液

    1瓶(12ml)

    1瓶(6.0ml)

    即用型

     

    自備材料

    • 蒸餾水。
    • 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
    • 振蕩器及磁力攪拌器等。

     

    安全性

    • 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
    • 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
    • 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

     

    操作注意事項

    • 試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
    • 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
    • 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
    • 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
    • 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
    • 洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
    • 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
    • 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
    • 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

     

    ELISA 檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法

    • 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
    • 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
    • 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
    • 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
    • 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

     

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